外周血的EGFR突变检测

研究显示，大部分晚期NSCLC患者的血液中存在循环游离DNA(cfDNA，cell freeDNA)。cfDNA主要来源于凋亡或坏死的细胞，包括正常细胞和肿瘤细胞，如果来自肿瘤细胞称为循环肿瘤DNA( ctDNA)。当肿瘤组织难以获取时，血液循环游离或肿瘤DNA(cf/ctDNA)检测是突变分析合适的替代选择。目前外周血的EGFR突变检测方法主要有罗氏诊断Cobas，Taqman-ARMS，Bio-rad 微滴式数字 PCR，BEAMing数字PCR和二代测序（NGS）等。

罗氏诊断Cobas

cobas® EGFR Mutation Test v2，这是一款以血液为基础的、用于特罗凯的伴随诊断试剂盒。这是一种多重qPCR检测，能够扫描ctDNA或组织来源的DNA，定性检测EGFR基因上七个位点的42种不同突变。

Taqman-ARMS

ARMS法即扩增阻滞突变系统，也称等位基因特异性PCR。用PCR对突变基因进行检测时，只有与突变DNA完全互补的引物才可延伸并得到PCR扩增产物。该方法先通过等位基因特异性引物将DNA突变点富集；然后用设计的TaqMan荧光探针将富集的DNA突变点通过荧光信号的积累检测出来。

Bio-Rad微滴式数字PCR

微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。

BEAMing数字PCR

BEAMing数字PCR检测是结合了磁珠法乳浊液扩增和流式细胞术的一项技术，灵敏性高，而且能对肿瘤DNA分子突变进行定量。

二代测序平台

NGS技术平台可并行检测成百上千的基因,可检测原发肿瘤、转移灶甚至外周血中游离的肿瘤DNA（ctDNA）和RNA。相对于传统的Sanger测序法，NGS法避免了克隆过程，直接使用接头进行并行PCR(聚合酶链反应)、测序反应，因此其数据通量得到大幅提高，可以在更短的时间内对更多的DNA 进行测序。

小结

肺癌基因具有时空异质性。单次组织活检只能分析肿瘤的一部分，可能会错过别处存在的突变。同时，也不可能经常取得肿瘤组织进行基因检测。相比之下，液体活检则更容易，更好地反映整个肿瘤的突变时空分布。
微滴数字PCR法和BEAMing数字PCR法比ARMS法和COBAS法具有更高的敏感性，但特异性稍差。以上四种方法仅检测已知的基因突变。
NGS 技术可以进行全基因组范围内的基因变异分析，包括基因突变、重排以及扩增。然而由于缺乏标准化的检测流程，在样本处理、测序深度和数据分析方面的差异导致结果的重复性欠佳。
今年ASCO会议报道了使用三种检测方法对CO-1686临床的患者组织（Qiagen NGS）、血液（BEAMing法）以及尿液标本（Trovagene NGS）进行EGFRT 790M突变检测。结果显示：血浆检测T790M突变与组织T790M的一致率为81.5%，尿液检测的T790M突变与组织检测的一致率为83.8%。

谢谢分享，辛苦了

请问文中表格的数据，是显示体液二代NGS检测的准确性比较差吗？

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